超分辨顯微鏡的樣品采集技巧主要包括以下幾個關鍵步驟:
樣品準備:首先,選擇適合超分辨率顯微鏡分辨率的樣品。樣品應具備較高的熒光信號和較低的背景噪聲水平,以獲取清晰的圖像。常見的適用樣本包括微膠束、活細胞、單分子和納米顆粒等。
熒光標記:在使用超分辨率顯微鏡之前,對樣品進行熒光標記至關重要。標記方法包括使用熒光探針、染料或免疫標記技術。確保標記物能與您感興趣的結構高度特異性地結合,這有助于在后續的圖像采集中突出顯示這些結構。
光路參數調整:調整光源、檢測器和鏡片的位置和設置是確保高質量圖像的關鍵。根據儀器的操作手冊進行正確設置,確保光路參數的準確性和優化。
調節焦距:超分辨率顯微鏡需要在樣品和鏡片之間形成Z佳焦距。通過調節顯微鏡的焦距,確保樣品在成像時處于Z佳狀態,從而獲得Z高的分辨率。
選擇成像模式:根據樣品類型和感興趣的結構,選擇適合的超分辨率成像模式。常見的成像模式包括結構照明顯微鏡(SIM)、刺激發射顯微鏡(STED)和單分子顯微鏡等。選擇適當的成像模式有助于提高圖像的質量和分辨率。
圖像采集:在顯微鏡軟件中選擇適當的參數并開始圖像采集。確保設置適當的曝光時間,以避免圖像過曝或過暗。同時,根據需要對圖像進行預處理,如對比度增強或噪聲減少,以提高圖像質量。
在整個樣品采集過程中,保持操作環境的清潔和穩定至關重要。此外,定期維護和校準超分辨顯微鏡也是確保高質量圖像的關鍵。
請注意,這些技巧和建議是基于一般的超分辨顯微鏡操作原則。實際操作中可能還需要根據具體的設備型號、樣品特性和測試需求進行更具體的調整和優化。因此,建議在進行超分辨顯微鏡樣品采集時,參考相關儀器的操作手冊和專業文獻,以確保獲得Z佳的圖像質量和分辨率。